D

光学显微镜的使用步骤：
1、取镜和安放
①右手握住镜臂，左手托住镜座。
②把显微镜放在实验台上，略偏左。安装好目镜和物镜。
2、对光
①转动转换器，使低倍物镜对准通光孔。注意，物镜的前端与载物台要保持2厘米的距离。
②把一个较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内，右眼睁开，便于以后观察画图。转动反光镜，看到明亮视野。
3、观察
①安装装片：把所要观察的载玻片放到载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔。
②调焦：转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，眼睛看着物镜以免物镜碰到玻片标本，直到物镜接近载玻片。这时左眼向目镜内看，同时反向转动粗准焦，使镜筒缓缓上升，直到找到物像，物像不清晰，再调节细准焦螺旋，使物像更加清晰。
4．整理实验台收镜。
综上所述，使用显微镜的正确操作步骤应该是：①取镜和安放、③对光、④观察、②收镜，D正确。
故选：D。