C

用显微镜进行观察时，视野中出现了的污点，污点的位置只有三种可能：目镜、物镜或玻片标本上。判断的方法是转动目镜或移动玻片。转动目镜污点动就在目镜，不动就不在目镜；移动载玻片，污点移动就在玻片，不动就不在玻片；如果不在目镜和玻片，那就一定在物镜上。题干中，移动玻片标本，污物不动；换用洁净的目镜后，污物仍然存在，说明污点一定在物镜。
故选：C。