B

用显微镜进行观察时，视野中出现了的小污点，小污点的位置只有三种可能，目镜、物镜或玻片标本，判断的方法是转动目镜或移动玻片标本。转动目镜小污点动就在目镜，不动就不在目镜；移动玻片标本，小污点移动就在玻片标本，不动就不在玻片标本；如果不在目镜和玻片标本，那就一定在物镜上。题干中：转动目镜和移动玻片标本都不能把视野中的污点移动，说明小污点一定在物镜上。
故选：B。