D

用显微镜进行观察时，视野中出现了的污点，污点的位置只有三种可能，目镜、物镜或玻片标本，判断的方法是转动目镜或移动玻片。转动目镜污点动就在目镜，不动就不在目镜；移动载玻片，污点移动就在载玻片，不动就不在载玻片；如果不在目镜和载玻片，那就一定在物镜上。所以在用显微镜观察时，视野中有一个污点，移动装片和换一个目镜镜头，污点都没被移去，那么污点肯定是在物镜上。
故选：D。