B

A、视野中有气泡，是盖盖玻片时不规范引起的，正确的方法用镊子夹起盖玻片，使它的一端先接触载玻片上的液滴，然后缓缓放平，A正确。
B、用显微镜进行观察时，视野中出现了污点，污点的位置只有三种可能：目镜、物镜或玻片标本，不可能在聚光镜上，B错误。
C、用显微镜进行观察的时候，被观察的材料必须是“薄而透明”，这是因为光线能透过材料，所以取材过厚，应重新取材，C正确。
D、如果材料未完全展平，细胞会出现重叠现象，所以材料应完全展平，D正确。
故选：B。